Cum să alegi coloana corectă?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-04 17:32:46 Thursday

Summary: ① Matricea de împachetare a coloanei cromatografice A. Matrice de silicagel: puritate ridicată, cost redus, rezistență ridicată, modificare chimică ușoară, dar intervalul de pH este limitat. Majoritatea materialelor de umplutură cu matrice de ......

① Matricea de împachetare a coloanei cromatografice
A. Matrice de silicagel: puritate ridicată, cost redus, rezistență ridicată, modificare chimică ușoară, dar intervalul de pH este limitat. Majoritatea materialelor de umplutură cu matrice de silice sunt stabile între pH 2-8, dar faza lipită cu silicagel special modificată poate fi stabilizată la pH 1,5-10.
B. Matrice polimerică: gamă largă de pH de aplicare, temperatură stabilă (temperatura ridicată poate atinge peste 80 de grade) și rezistență mecanică scăzută.
②Forma particulelor
Majoritatea materialelor de umplutură HPLC moderne sunt particule sferice, dar uneori particule neregulate. Particulele sferice asigură o presiune mai mică a coloanei, o eficiență și stabilitate mai ridicate a coloanei și o viață mai lungă a coloanei. Când se utilizează o fază activă cu vâscozitate ridicată; particulele neregulate au o suprafață specifică mai mare și un preț relativ scăzut.
③Dimensiunea particulelor
Cu cât dimensiunea particulelor este mai mică, cu atât eficiența este mai mare și rezoluția este mai mare, dar în același timp va duce la o cădere mai mare de presiune a coloanei. Alegeți material de ambalare de 1,5-3μm pentru a rezolva unele probe complexe, UPLC poate folosi ambalaj de 1,5μm; ca coloană semipreparativă sau preparativă este utilizată o altă garnitură de particule de 10 μm sau mai mare.
④Conținutul de carbon
Conținutul de carbon al unei coloane cromatografice se referă la raportul dintre faza legată de pe suprafața gelului de silice, care este legat de suprafața specifică și de acoperirea de legătură. Conținutul ridicat de carbon îmbunătățește capacitatea coloanei, rezoluția și timpul de analiză și este utilizat pentru probe complexe care necesită rezoluție înaltă; conținutul scăzut de carbon are un timp scurt de analiză și prezintă o selectivitate diferită și este utilizat pentru analiza rapidă a probelor simple și a fazelor active cu conținut ridicat de apă. Mostre de stare. În general, conținutul de carbon al C18 variază de la 7-19%.
⑤ Dimensiunea porilor și suprafața specifică
Mediul de adsorbție HPLC este particule poroase și cea mai mare parte a suprafeței de reacție se află în pori. Prin urmare, moleculele trebuie să intre în pori pentru a fi adsorbite și separate.
Dimensiunea porilor coloanei cromatografice și suprafața specifică sunt două concepte complementare. Dimensiunea porilor este mică, iar suprafața specifică este mare și invers. Suprafață specifică mare, crește reacția dintre probă și faza legată, crește stocarea, încărcarea probei și separarea componentelor complexe; suprafață specifică mică, timp de echilibrare rapid, potrivit pentru analiza gradientului.
⑥ Volumul porilor și rezistența mecanică
volumul porilor, cunoscut și sub numele de „volumul porilor”. Se referă la dimensiunea volumului gol pe particulă. Poate reflecta bine rezistența mecanică a umpluturii. Materialele de umplutură cu volum mare de pori au o rezistență mecanică puțin mai slabă decât cele cu volum mic de pori. Materialele de umplutură cu un volum al porilor de 1,5 ml/g sau mai puțin sunt utilizate în principal pentru separarea HPLC, în timp ce materialele de umplutură cu un volum al porilor mai mare de 1,5 ml/g sunt utilizate pentru cromatografia de excludere a dimensiunii și cromatografia la presiune joasă.
⑦ capac de capăt
Capacul la capătul coloanei poate reduce vârfurile de decantare ale compușilor bazici polari datorită interacțiunii cu grupările silanol expuse. Faza legată neblocata va avea o selectivitate diferită în comparație cu faza legată blocată, în special pentru probele polare.