Summary: După ce un laborator obține o nouă linie celulară, linia celulară trebuie mai întâi să fie cultivată și extinsă și apoi congelată. Crioconservarea celulelor poate fi folosită în primul rând ca rezervă atunci când celulele sunt pierdute d......
După ce un laborator obține o nouă linie celulară, linia celulară trebuie mai întâi să fie cultivată și extinsă și apoi congelată. Crioconservarea celulelor poate fi folosită în primul rând ca rezervă atunci când celulele sunt pierdute din cauza poluării și a altor condiții. În plus, aproape toate celulele suferă un anumit grad de variație în timpul procesului de cultură și trecere. Pentru a menține consistența rezultatelor experimentale, în general, celulele nu pot fi cultivate timp de zeci de generații. Dacă este utilizat din nou, este necesar să se dezghețe și să se cultive celulele crioconservate, cu mai puține treceri înainte de utilizare.
Există patru puncte principale în procesul de congelare a celulelor: recoltarea celulelor, utilizarea agenților de protecție, rata de congelare și mediul de depozitare.
Recoltarea celulelor
Celulele utilizate pentru crioconservare sunt selectate în general atunci când celulele sunt aproximativ 90% confluente. În acest moment, creșterea celulelor este bună și numărul de celule este mare, iar mediul de cultură trebuie schimbat cu 24 de ore înainte de recoltarea celulelor. Metoda de recoltare a celulelor pentru crioconservare este aceeași ca de obicei. Se centrifugă la 100xg timp de 5 minute pentru a colecta celulele și a le resuspenda. Celulele vii sunt numărate. Se diluează sau se concentrează până la de două ori concentrația finală de celule pentru conservarea celulelor (de obicei 4-10 milioane de celule/ml), se adaugă un volum egal de soluție de amestec de agent de protecție a mediului de cultură care a fost preparat și se amestecă ușor și se amestecă alicot în tubul de crioconservare, crioconservare.
Utilizarea agenților de protecție.
În crioconservarea celulelor, DMSO este în general utilizat ca agent de protecție. În crioconservarea celulelor, concentrația finală de DMSO utilizată este în general de 5-15%. Concentrația de DMSO în soluția de crioconservare a unei celule specifice poate fi găsită din ATCC. Pentru celulele deosebit de sensibile, în special celulele hibridom, poate fi mai bine să folosiți 95% ser și 5% DMSO atunci când se crioconserva. Când utilizați agentul de protecție, utilizați mediu de cultură sau ser pentru a obține de două ori concentrația finală, apoi amestecați-l cu un volum egal de mediu de cultură celulară în suspensie. Rata de congelare a celulelor
Viteza de înghețare a celulelor este controlată cel mai bine pentru a permite celulelor timp suficient pentru a fi deshidratate fără a fi deteriorate de deshidratarea excesivă. Pentru majoritatea celulelor, este adecvată o scădere a temperaturii de 1 până la 3°C pe minut. Operațiunea obișnuită este să puneți celulele la -20°C timp de 1-2 ore, apoi să le puneți la frigider -80°C peste noapte (dacă nu există frigider -80°C, puteți folosi în schimb gheață carbonică) și apoi transferați în rezervorul de azot lichid sau sub -130 Depozitare pe termen lung la frigider la ℃.
Mediu de depozitare
Temperatura de depozitare pe termen lung a celulelor este de -130 ℃ sau mai mică. Temperatura stratului gazos din rezervorul de azot lichid este între -140℃ și -180℃. Celulele pot fi depozitate în stratul gazos sau scufundate în azot lichid. Dacă este posibil, cel mai bine este să se depoziteze în stratul gazos, deoarece poate evita intrarea azotului lichid în depozitul de congelare. Tubul provoacă o explozie atunci când celulele sunt scoase (dar în acest fel, doar o cantitate mică de azot lichid poate fi stocată în rezervorul de azot lichid, care trebuie adăugat frecvent). Celulele pot fi, de asemenea, păstrate în frigider la -80℃ timp de câteva luni sau cam asa ceva.
英语
阿拉伯语
���ļ���