Cum se curăță și se regenerează coloana după contaminare?

? ? ? ? ? ? ? ?

Date:2021-11-25 16:42:09 Thursday

Summary: Când o coloană cromatografică este contaminată, comportamentul ei cromatografic va fi oarecum diferit de cel al unei coloane necontaminate. Coloanele contaminate pot cauza probleme de contrapresiune. Coloana contaminată în fază inversă trebuie cu......

Când o coloană cromatografică este contaminată, comportamentul ei cromatografic va fi oarecum diferit de cel al unei coloane necontaminate. Coloanele contaminate pot cauza probleme de contrapresiune. Coloana contaminată în fază inversă trebuie curățată și regenerată pentru a restabili condițiile inițiale de funcționare.
Cheia pentru regenerarea unei coloane HPLC contaminate este de a cunoaște natura contaminantului și de a găsi un solvent adecvat pentru a-l îndepărta. Dacă contaminarea este cauzată de acumularea de substanțe puternic reținute în timpul injecțiilor repetate, pașii simpli de îndepărtare a acestor contaminanți pot restabili adesea comportamentul cromatografic. Uneori, după multe operații, coloana cromatografică este spălată cu 90-100% solvent B (solventul mai puternic din sistemul de fază inversă cu doi solvenți) timp de 20 de volume pentru a elimina contaminanții. De exemplu, solvenţi neapoşi cum ar fi metanol, acetonitril şi tetrahidrofuran pot fi utilizaţi pentru lipidele reziduale din coloană.

În general, toate metodele de curățare au forme similare. Solvenții utilizați cresc cu puterea solventului. Adesea, ultimul solvent este foarte hidrofob (cum ar fi acetatul de etil sau chiar hidrocarbura) și poate fi folosit pentru a dizolva substanțe nepolare precum lipidele și uleiurile. Trebuie să ne asigurăm că fiecare solvent dintr-o serie de solvenți poate fi amestecat cu următorul solvent.
La sfârșitul procesului de curățare, este necesar să reveniți la sistemul original de solvenți cu ajutorul unui solvent miscibil cu tărie medie. De exemplu, izopropanolul este un solvent foarte bun ca pas intermediar deoarece este miscibil cu n-hexan sau diclormetan și, de asemenea, cu solvenți în fază apoasă. Cu toate acestea, vâscozitatea izopropanolului este foarte mare și trebuie asigurat un debit scăzut pentru a evita presiunea excesivă a pompei. La spălarea coloanei cromatografice, lichidul de spălare este conectat direct la sticla de deșeuri de la capătul de ieșire al coloanei cromatografice și nu poate curge prin celula de detectare pentru a evita contaminarea celulei de detectare.
Coloana cromatografică în fază inversă nu utilizează soluție tampon, vă rugăm să utilizați următoarea serie de solvenți pentru regenerare:
100% metanol → 100% acetonitril → 75% acetonitril-25% izopropanol → 100% izopropanol → 100% clorură de metilen → 100% n-hexan → 100% clorură de metilen → 100% izopropanol → 100% izopropanol → 100% acetonitril.
Coloana de cromatografie în fază inversă utilizează soluție tampon, vă rugăm să utilizați următoarea serie de solvenți pentru regenerare:
apă → acetonitril → cloroform (sau izopropanol) → acetonitril → apă.